猪轮状病毒IgG抗体PPA-ELISA检测试剂盒使用说明书

Service manual of PPA-ELISA Kit for RV IgG antibody

【产品简介】猪轮状病毒病是由猪轮状病毒引起的仔猪爆发消化道功能紊乱的一种急性肠道传染病，主要症状为厌食、呕吐、下痢，中猪和大猪为隐性感染。轮状病毒对外界环境的抵抗力较强，在18～20℃的粪便和乳汁中能存活7～9个月。是我国猪群中危害最严重的三种病毒性腹泻病之一，发病后没有有效的治疗办法，给我国的养猪业造成了巨大经济损失。

VP7蛋白是RV的主要结构性蛋白，在病毒的包装中起重要作用，可诱导机体产生保护性抗体。本试剂盒采用ELISA方法检测猪血清中的特异性轮状病毒 IgG抗体,适用于猪场轮状病毒疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。

【产品内容】

【成分性状】 

【用法与判定】 按以下步骤进行：

1、需要自备的器材

1.1 微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的枪头；

1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒；

1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪；

1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管；

1.6 蒸馏水或去离子水。

2、样品的制备  

用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释(建议：2μl血清样品加入198μl样品稀释液中)，样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

3、操作步骤 （﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温）

3.1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；

3.2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；

3.3  取100μl经1:100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；

3.4  37℃孵育30min；

3.5  将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；

﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；

3.6  每孔加100μl酶标结合物；

3.7  37℃孵育30min；重复步骤3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光显色）；

3.10 每孔加100μl的终止液；

3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。

4、试验有效性判断

4.1阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD450值≤0.2；

4.2阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD450值≥0.4；

4.3临界值(C.O.)的计算：临界值=0.17+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值都大于0.2时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算。

4.4结果判定：检测样品OD450值≥临界值，判定该检测样品为阳性；检测样品OD450值＜临界值判定该检测样品为阴性。

【注意事项】

（1）待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。

（2）试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。

（3）底物液和终止液对皮肤有刺激性，注意防护。

（4）底物液不要暴露于强光和任何氧化剂；使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。

（5）所有试剂应在2～8℃存放；使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止试剂盒组分受到污染。

（7）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的组分不要混用。

（8）操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

【规格与包装】96T×2

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为6个月

【联系人】 王金良，董艳凯   电话：0543-3403060

仅供兽医诊断使用