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羊小反刍兽疫病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒使用说明书 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
作者:佚名 文章来源:本站原创 点击数 更新时间:2015-3-10 13:15:23 文章录入:熊方方 责任编辑:熊方方 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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羊小反刍兽疫病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒使用说明书 Service manual of ELISA Kit for PPR Virus IgG antibody 【产品简介】小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)俗称羊瘟,是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种急性接触性传染病,其以口炎、发热、腹泻、流鼻液为特征。本病的易感动物为山羊,也可感染绵羊、白尾鹿等,但对牛无感染性。 N蛋白是PPRV的一种重要结构蛋白,在病毒的包装中起重要作用,可诱导机体产生保护性抗体。本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测羊血清中抗PPRV N蛋白抗体IgG,用于免疫疫苗后抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估羊场小反刍兽疫免疫状况,也可用于小反刍兽疫的流行病学调查。 【产品内容】
【成分性状】
【用法与判定】 按以下步骤进行: 1、需要自备的器材 1.1 微量移液器; 1.2 微量移液器配套使用的枪头; 1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒; 1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪; 1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管; 1.6 蒸馏水或去离子水。 2、样品的制备 用样品稀释液将待检血清样品进行40倍稀释(建议:5μl血清样品加入195μl样品稀释液中),样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。 注意:①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。 3、操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应平衡至室温) 3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照; 3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照; 3.3 取100μl经1:40稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录; 3.4 37℃孵育1h; 3.5 将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复5次,每次30s; ﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净; 3.6 每孔加100μl酶标结合物; 3.7 37℃孵育1h;重复步骤3.5; 3.9 每孔加100μl底物液; 3.9 37℃孵育10min(避光显色); 3.10 每孔加100μl的终止液; 3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。 4、试验有效性判断 4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照OD450值≤0.2; 4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照OD450值≥0.4; 4.3临界值(C.O.)的计算:临界值=0.18+阴性对照均值;阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃,如所有阴性对照OD450值都大于0.2时须重复实验;阴性对照于0.05时以0.05计算。 4.4结果判定:检测样品OD450值≥临界值,判定该检测样品为阳性;检测样品OD450值<临界值,判定该检测样品为阴性。 【注意事项】 (1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。 (2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。 (3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。 (4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。 (5)所有试剂应在2~8℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。 (6)注意防止试剂盒组分受到污染。 (7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的组分不要混用。 (8)操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。 【规格与包装】96T×2 【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为6个月 【联系人】 王金良,董艳凯 电话:0543-3403060 仅供兽医诊断使用 |
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