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兔瘟病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒使用说明书

作者:佚名    文章来源:本站原创    点击数:    更新时间:2011-2-16     

 

兔瘟病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒使用说明书

Service manual of ELISA Kit for RHD Virus IgG antibody

 

【产品简介】兔瘟又称兔出血症RHD是由兔瘟病毒引起的一种急性、高度传染性、高致死性的疾病,一年四季均可发生,各种家兔均易感,给我国养兔业造成巨大的经济损失。在兔瘟的免疫预防工作中,接种了兔瘟疫苗后,由于多种因素可能导致免疫兔不产生或产生低水平兔瘟病毒抗体。

VP60蛋白为病毒衣壳蛋白,是兔瘟病毒唯一的结构蛋白,与诱导抗病毒感染免疫反应直接相关,是病毒免疫保护性抗原可诱导机体产生保护性抗体。本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测兔血清中抗兔瘟病毒 VP60蛋白抗体IgG用于免疫兔瘟疫苗后的抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估兔场兔瘟免疫状况,也可用于兔瘟的流行病学调查。

【产品内容】

试剂盒主要成分

数 量

包被板

96T×2

阳性对照 

1ml×1

阴性对照 

1ml×1

酶标结合物

20ml×1

样品稀释液

20ml×2

底物液

20ml×1

终止液

20ml×1

20×浓缩洗涤液

25ml×1

封口胶

2

使用说明书

1

【成分性状】

包被板

96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附

酶标结合物

略带黄色澄明液体

阴、阳性对照

略带黄色澄明液体

样品稀释液

无色或略带黄色澄明液体

浓缩洗涤液

无色或略带黄色澄明液体

底物液

无色或微蓝色澄明液体

终止液

无色澄明液体,低温条件下可能会出现絮状沉淀

【用法与判定】 

1需要自备的器材

1.1微量移液器;

1.2 微量移液器配套使用的枪头;

1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒;

1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪;

1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管;

1.6 蒸馏水或去离子水。

2样品的制备 

用样品稀释液将待检血清样品进行40倍稀释(建议:5μl血清样品加入195μl样品稀释液中,样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。注意:制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;不能稀释阴性、阳性对照。

3操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应恢复至室温

3.1  A1A2孔中分别加入100μl阴性对照;

3.2  A3A4孔中分别加入100μl阳性对照;

3.3  100μl140稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录;

3.4  37℃孵育30min

3.5  将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复5次,每次30s

加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;

3.6  每孔加100μl酶标结合物;

3.7  37℃孵育30min;重复步骤3.5

3.8  每孔加100μl底物液;

3.9  37℃孵育10min(避光显色)

3.10 每孔加100μl的终止液;

3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。

4试验有效性判断

4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450≤0.2

4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450≥0.4

4.3临界值(C.O.)计算:临界值=0.18+阴性对照均值;阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃,如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复实验;阴性对照低于0.05时以0.05计算。

4.4结果判定: 检测样品OD450临界值,判定该检测样品为阳性; 检测样品OD450值<临界值,判定该检测样品为阴性。

【注意事项】

1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。

2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。

3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。

4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。

5)所有试剂应在28℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回28℃

6)注意防止试剂盒分受到污染。

7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的分不要混用。

8)操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

【规格与包装】96T×2

【贮藏与有效期】28℃避光保存,有效期为6个月

【联系人】 王金良,董艳凯         电话:0543-3403060

仅供兽医诊断使用

文章录入:admin    责任编辑:熊方方 
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