兔瘟病毒IgG抗体PPA-ELISA检测试剂盒使用说明书
Service manual of PPA-ELISA Kit for RHD Virus IgG antibody
【产品简介】兔瘟(RHD)是一种急性、热性、败血性传染病,一年四季均可发生,各种家兔均易感,给养兔业造成巨大的损失。在兔瘟的免疫预防工作中,接种了兔瘟疫苗后,由于多种因素可能导致兔不产生或产生低水平兔瘟病毒抗体。
本试剂盒采用兔瘟病毒经灭活、纯化、浓缩制成的抗原作为固相抗原包被微孔板,用于检测兔血清中抗RHD病毒IgG抗体。用于免疫兔瘟疫苗后的抗体水平监测,指导免疫预防工作,评估兔场兔瘟免疫状况,也可用于兔瘟的流行病学调查。
【产品内容】
试剂盒主要成分 |
数 量 |
抗原包被板 |
96孔×2 |
阳性对照血清 |
1ml×1 |
阴性对照血清 |
1ml×1 |
10×SPA酶标抗体 |
2ml×1 |
10×样品稀释液 |
10ml×1 |
底物溶液 |
20ml×1 |
终止液 |
20ml×1 |
20×浓缩洗涤液 |
30ml×1 |
使用说明书 |
1份 |
【成分性状】
抗原包被板 |
96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附。 |
SPA酶标抗体 |
无色澄明液体。 |
阴、阳性对照血清 |
无色或略带红色澄明或半透明液体。 |
样品稀释液
浓缩洗涤液 |
无色澄明或半透明液体。
无色或略带黄色的澄明液体。 |
底物溶液 |
无色或微蓝色澄明液体。 |
终止液 |
无色澄明液体,低温条件下可能会出现絮状沉淀。 |
【用法与判定】 按以下步骤进行:
1 需要自备的器材
1.1微量移液器,用来吸取10μl、100μl、200μl和1000μl的液体;
1.2 微量移液器使用的枪头;
1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒;
1.4 适用于检测96孔微量反应板的酶标仪;
1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管;
1.6 蒸馏水或去离子水。
2 样品的制备 用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释(2μl血清样品加入198μl稀释好的样品稀释液中),样品加入抗原包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。
注意:①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照血清。
3 操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应恢复至室温。)
3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照血清;
3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照血清;
3.3取100μl经1:100稀释好的待检样品液加入相应孔中,并做好记录;
3.4 室温或37℃孵育1h;
3.5将各孔的液体弃入废液桶。每孔再加约300μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释。)进行洗板,重复3~5次,每次2~3min;
﹡加洗涤液时注意防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;
3.6 每孔加入100μl使用样品稀释液1:10稀释好的酶标抗体;
3.7室温或37℃孵育1h;
3.8 重复步骤3.5;
3.9 每孔加100μl底物溶液;
3.10室温孵育5min(尽量避开强光照射);
3.11每孔加100μl的终止液;
3.12立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。
4 试验有效性判断
4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450值≤0.2;
4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450值≥0.4;
4.3临界值(C.O.)的计算:临界值=0.18+阴性对照孔均值;阴性对照孔OD450值大于0.2时应舍弃,如所有阴性对照孔OD450值都大于0.2时须重复实验;阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。
4.4结果判定:检测样品OD450值≥临界值判定该检测样品为阳性;检测样品OD450值<临界值判定该检测样品为阴性。
【注意事项】
(1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。
(2)样品和试剂盒使用的地方不要吸烟、喝水和吃东西。
(3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。
(4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂。使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
(5)所有试剂应在2~8℃存放。使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。
(6)注意防止试剂盒成分受到污染。
(7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的成分不要混用。
(8)操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。
【规格与包装】96×2孔/盒
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为6个月。
【销售联系人】 王金良 电话:0543-3403060
【技术支持】 祖立闯
仅供兽医诊断使用
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