【注意】 用前请认真阅读注意事项。
【用途】 用于生物制品中支原体污染的PCR检测。
【试剂】
编号 |
数量 |
保存 |
编号 |
数量 |
保存 |
SR-I |
1.3mL |
室温 |
TU-Z |
25μl |
-20℃ |
SR-II |
130μl |
-20℃ |
TU-J |
25μl |
-20℃ |
SR-Ⅲ |
900μl |
4℃ |
TU-5 |
1.0mL |
-20℃ |
TU-1 |
120μl |
-20℃ |
TU-6 |
12μl |
-20℃ |
TU-2 |
100μl |
-20℃ |
TU-7 |
40μl |
-20℃ |
TU-3 |
25μl |
-20℃ |
TU-8 |
70μl |
-20℃ |
TU-4 |
25μl |
-20℃ |
TU-9 |
30μl |
4℃ |
T |
1.2mL |
-20℃ |
|
【操作步骤】
1 . DNA的抽提
(1) 取待检的生物制品(或质控样品T)530μl,加60μl SR-I和6μl SR-II,55℃水浴1h,并不时颠倒混匀。
(2) 加入等量酚:氯仿(1:1),漩涡振荡20秒,4℃,12000r/min,离心5min。
(3) 取上清,加入等量氯仿,振荡混匀,4℃,12000r/min,离心5min。
(4) 取400μl上清,加入800μl无水乙醇,再加40μl SR-III,混匀。-20℃放置30min,4℃、12000r/min,离心10min,小心倾去上清,沉淀即为DNA。室温晾干或超净工作台风干15~25min,加入15μl TU-5溶解即为模板,即用或-20℃保存备用。
3.PCR操作
加样体系:(将下列试剂加入0.5mLPCR反应管中,最好在冰浴条件下加样。
TU-1 |
5.0μl |
TU-2 |
4.0μl |
TU-3 |
1.0μl |
TU-4 |
1.0μl |
TU-Z |
1.0μl |
TU-J |
1.0μl |
模板 |
1.0μl |
TU-5 |
35.5μl |
TU-6(用完后立即放回) |
0.5μl |
反应条件:
4.电泳:
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加入3μl TU-8,在100V 电压下,1×TAE液中电泳15min,在紫外成像仪下观察结果。
[结果判定] 在280bp 左右的位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。
K:空白对照;1:检测的阳性样品;2:阳性对照;
[注意事项]
1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2. 本试剂盒为20头份量试剂,操作失误或移液器不准确造成最终剂量不够情况,不予负责。
3. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
4. 尽量建立PCR试验专用操作区,避免交叉污染。
5. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
6. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。
7. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。
8. TU-9所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤。如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗。
[有效期] 本制品有效期为1年,生产日期见包装内侧。
[联系人] 王金良、管宇 电话:0543-3403060
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