猪流行性乙型脑炎病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒使用说明书

Service manual of ELISA Kit for JE Virus IgG antibody

【产品简介】猪流行性乙型脑炎（JE）是一种以中枢神经系统发生病变的急性传染病，也是一种人畜共患的自然疫源性疾病，给国内养猪业造成巨大的损失。在猪流行性乙型脑炎的免疫预防工作中，接种了猪流行性乙型脑炎疫苗后，由于多种因素可能导致猪不产生或产生低水平猪流行性乙型脑炎病毒抗体。

E蛋白是JE病毒粒子表面最主要的结构蛋白，其表面的抗原决定簇，具有血凝活性和中和活性，能刺激机体产生血凝抑制抗体、补体结合抗体、中和抗体，引起宿主产生保护性的免疫应答。本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测猪血清中抗JEV E蛋白抗体IgG，用于免疫猪流行性乙型脑炎疫苗后的抗体动态水平监测，指导免疫预防工作，评估猪场猪流行性乙型脑炎免疫状况，也可用于猪流行性乙型脑炎的流行病学调查。

【产品内容】

【成分性状】

【用法与判定】 按以下步骤进行：

1 需要自备的器材

1.1微量移液器，用来吸取10μl、100μl、200μl和1000μl的液体；

1.2 微量移液器使用的枪头；

1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒；

1.4 适用于检测96孔微量反应板的酶标仪；

1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管；

1.6 蒸馏水或去离子水。

2 样品的制备  用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释(2μl血清样品加入198μl稀释好的样品稀释液中)，样品加入抗原包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。

注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照血清。

3 操作步骤 （﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀，所有试剂应恢复至室温。）

3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照血清；

3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照血清；

3.3取100μl经1:100稀释好的待检样品液加入相应孔中，并做好记录；

3.4 室温或37℃孵育1h；

3.5将各孔的液体弃入废液桶。每孔再加约300μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释。）进行洗板，重复3～5次，每次2～3min；

﹡加洗涤液时注意防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；

3.6 每孔加入100μl使用样品稀释液1:10稀释好的酶标抗体；

3.7室温或37℃孵育1h；

3.8 重复步骤3.5；

3.9 每孔加100μl底物溶液；

3.10室温孵育5min（尽量避开强光照射）；

3.11每孔加100μl的终止液；

3.12立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4 试验有效性判断

4.1阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD₄₅₀值≤0.2；

4.2阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD₄₅₀值≥0.4；

4.3临界值(C.O.)的计算：临界值=0.18+阴性对照孔均值；阴性对照孔OD₄₅₀值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照孔OD₄₅₀值都大于0.2时须重复实验；阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。

4.4结果判定：检测样品OD₄₅₀值≥临界值判定该检测样品为阳性；检测样品OD₄₅₀值＜临界值判定该检测样品为阴性。

【注意事项】

（1）待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。

（2）样品和试剂盒使用的地方不要吸烟、喝水和吃东西。

（3）底物液和终止液对皮肤有刺激性，注意防护。

（4）底物液不要暴露于强光和任何氧化剂。使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。

（5）所有试剂应在2～8℃存放。使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止试剂盒成分受到污染。

（7）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的成分不要混用。

（8）操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

【规格与包装】96×2孔/盒

【贮藏与有效期】2～8℃避光保存，有效期为6个月。

【销售联系人】  王金良   管宇                           电话：0543-3403060

【技术支持】 祖立闯 

仅供兽医诊断使用