牛布鲁氏菌抗体ELISA检测试剂盒说明书

Service manual of ELISA kit for Brucella abortus antibody

【产品简介】】如果待检样品中含有布鲁氏菌抗体，就会与包被板上的布鲁氏菌抗原及第二步加入的抗牛二抗酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的抗牛二抗酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有布鲁氏菌抗体。本试剂盒采用间接ELISA 方法定性检测牛血清或血浆样本中的特异性布鲁氏菌抗体，可作为布鲁氏菌病的辅助检测。

【产品内容】

【用法与判定】 按以下步骤进行：

1需要自备的器材

1.1 微量移液器及套使用的枪头；

1.2 用来稀释洗涤液的500 ml量筒；

1.3 含450nm 和630nm 波长酶标仪；

1.4 用于稀释样品的1.5 ml Ep管；

1.5 蒸馏水或去离子水；

1.6 37℃恒温设备。

2 样品要求 

2.1 本试剂仅适用于检测牛血清或血浆。

2.2 为取得最佳实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；

2.3  短期（3 天内）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃以下，避免反复冻融。

3 操作步骤

3.1 洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×（2 号液）按1：10 稀释（例如，取100mL 洗涤液10×，加900mL 蒸馏水或去离子水混合），充分混匀即为工作浓度洗涤液。

3.2 样品稀释及加样：用样品稀释液（5 号液）将待检血清按1:400 稀释，在样品孔每孔仅加入已稀释的待检样品100μL；如果采用血清稀释板稀释样品，其使用方法详见说明书背面。

3.3 加对照品：阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。空白对照2 孔，每孔仅加入100μL样品稀释液；阴性对照2 孔，每孔仅加入100μL 阴性对照品；阳性对照2 孔，每孔仅加入100μL 阳性对照品。盖好封板膜，37℃避光反应30 分钟。洗板：甩去孔内液体每孔注满（若用洗板机每孔加250μL）工作浓度洗涤液洗涤3 次，每次均需停留1 分钟；最后一次甩净，拍干。

3.4 加酶反应：除空白对照孔外，其余每孔加酶标结合物（1 号液）100μL，盖好封板膜，37℃避光反应30 分钟。甩去孔内液体，如上洗板，拍干。

3.5显色反应：按所需用量，临用前取等体积底物液（3 号液）和显色液（4 号液）充分混匀，每孔加100μL，盖好封板膜，37℃避光反应10 分钟。

3.6.终止反应： 加终止液（6 号液）50μL，以空白对照调零，用酶标仪于450nm 波长（630nm作为参比波长）读取OD 值。

4 计算和结果判定：（本试剂盒仅供筛查，不作为确诊依据）

  有效性判定：

阴性对照孔OD 值≤0.20（若大于0.20 则实验无效）；

阳性对照孔OD 值≥0.30（若小于0.30 则实验无效）。

【检验结果的解释】

阳性对照平均OD值

S/P=

样品OD值

样品S/P ≥0.2，判为布鲁氏菌抗体阳性；

样品S/P <0.2，判为布鲁氏菌抗体阴性。

【注意事项】

1. 试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，必须室温平衡15-30 分钟，方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释前可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响效果。

3. 加试剂前应将试剂轻摇、混匀。

4. 孵育时必须用封板膜密封板孔，封板膜不可以重复使用。

5. 不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶之间瓶盖不可混用。

6. 用弃的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。

【规格与包装】192份/盒

【贮藏与有效期】2~8℃保存，防止冷冻，有效期为6 个月。

【联系人】 王金良                                   电话：0543-3403060

仅供兽医诊断使用